装完料的栽培袋要放入55×44×30公分的铁筐内，再移入锅内。灭菌方法多采用常压灭菌。常压灭菌时间应从锅内温度达到100℃时开始计算，持续6小时以上，再焖锅2小时。如灭菌期间温度降到100℃以下，灭菌时间至少要延长2小时以上，以做到彻底灭菌。
接种应严格无菌操作，熟练掌握接种技术，接种前用2天要用甲醛对接种箱（室）进行消毒，还应将所用的菌种瓶表面用2%的高锰酸钾溶液洗涤，所用的接种工具也要消毒才能与菌种一起放入接种箱（室）。对有怀疑的菌种，可先拔掉棉塞闻味，若是清香味，属合格菌种，若有酒、酸、臭味，则是坏菌种，应该淘汰。接种时要挖去瓶口老菌块，不要将菌种弄得太碎，菌种太碎萌发缓慢，易遭霉菌感染。一般一瓶二级菌可接三级菌（栽培袋）40-50袋。
